بهینه سازی بیان تولید پروتئین نوترکیب papg.acma در ﺳﻮﯾﻪ بیانی اﺷﺮﯾﺸﯿﺎ ﮐﻠﯽ

نویسندگان

فاطمه اشرفی

مربی، گروه زیست شناسی، دانشگاه آزاد اسلامی، واحد تهران شمال، تهران محمدرضا معصومیان

کارشناس ارشد، گروه فن آوری زیستی و علوم زیستی، دانشگاه صنعتی مالک اشتر، تهران امیر میرزایی

دکترا، باشگاه پژوهشگران جوان و نخبگان، دانشگاه آزاد اسلامی، واحد تهران شرق، تهران

چکیده

سابقه و هدف: اشریشیا کلی یوروپاتوژن (upec) یکی از مهمترین باکتری های بیماری زاست که باعث عفونت مجاری ادراری می شود و هنوز هیچ واکسن انسانی علیه آن ساخته نشده است. هدف از این مطالعه، ﺑﻬﯿﻨﻪ ﺳﺎزی بیان پروتئین ﻧﻮﺗﺮﮐﯿﺐ papg  به همراه پروتئین لنگری لاکتوباسیلوس به نام acma در اشریشیا کلی می باشد. ﻣﻮاد و روشﻫﺎ: ژن کدکننده papg.acma در وکتور کلونینگ pexa به صورت سنتتیک خریداری و در وکتور بیانی pet21a ساب کلون گردید. ﺑﯿﺎن ﭘﺮوﺗﺌﯿﻦ نوترکیب در میزبان بیانی اشریشیا کلی سویه اریگامی با روش sds-page و وسترن بلات مطالعه شد. تولید پروتئین فیوژن در مقیاس بالا تحت تاثیر ﺗﺮﮐﯿﺐ ﻣﺤﯿﻂ ﮐﺸﺖ، ﻏﻠﻈﺖﻫﺎی ﻣﺨﺘﻠﻒ iptg به ﻋﻨﻮان اﻟﻘﺎﮔﺮ و زﻣﺎن اﻟﻘﺎ در ﺑﯿﺎن پروتئین ﻧﻮﺗﺮﮐﯿﺐ papg.acma  بهینهﺳﺎزی گردید. ﯾﺎﻓﺘﻪﻫﺎ: با توجه به نتایج ﺑﻬﺘﺮﯾﻦ بیان در مقیاس بالا، ﺗﻮﺳﻂ ﻏﻠﻈﺖ 0.1 میلی مولار iptg در ﮐﺪورت ﻧﻮری  od600nm برابر با 3 تعیین ﺷﺪ. ﻣﺤﯿﻂ ﮐﺸﺖ ﭘﯿﭽﯿﺪه اﺻﻼح ﺷﺪه ﺣﺎوی گلوکز (6 گرم بر لیتر)، عصاره مخمر (20 گرم بر لیتر)، تریپتون (10 گرم بر لیتر)، kh2po4 (2.3 گرم بر لیتر) و k2hpo4 (12.5 گرم بر لیتر) ﺑﻪ ﻋﻨﻮان ﻣﺤﯿﻂ ﮐﺸﺖ ﺑﻬﯿﻨﻪ ﺗﻌﯿﯿﻦ ﮔﺮدﯾﺪ. ﺑﯿﺸﺘﺮﯾﻦ ﻣﻘﺪار ﺗﻮﻟﯿﺪ ﺑﯿﻮﻣﺲ و ﺑﯿﺎن ﭘﺮوﺗﺌﯿﻦ ﻫﺪف در ﻣﺤﯿﻂ ﮐﺸﺖ ﺑﻬﯿﻨﻪﺳﺎزی ﺷﺪه ﺑﻪ ﻣﯿﺰان  od600nm برابر با 5.5 ﺗﻌﯿﯿﻦ شد. ﻧﺘﯿﺠﻪﮔﯿﺮی: نتایج نشان داد که کلون سازی و بیان ژن papg.acma قابل انجام می باشد. همچنین اﺳﺘﻔﺎده از ﻣﻨﺒﻊ ﮐﺮﺑﻦ ﮔﻠﻮﮐﺰ در ﺗﺮﮐﯿﺐ ﻣﺤﯿﻂ ﮐﺸﺖ ﭘﯿﭽﯿﺪه ﻧﺴﺒﺖ ﺑﻪ ﻣﺤﯿﻂ ﮐﺸﺖ lb بیان ﺑﻬﺘﺮی ﻣﯽدﻫﺪ. در نهایت با تخلیص و ارزیابی ایمنی زایی پروتئین نوترکیب، می توان از آن به عنوان یک کاندیدای واکسن استفاده نمود.

برای دانلود باید عضویت طلایی داشته باشید

برای دانلود متن کامل این مقاله و بیش از 32 میلیون مقاله دیگر ابتدا ثبت نام کنید

اگر عضو سایت هستید لطفا وارد حساب کاربری خود شوید

منابع مشابه

ارزیابی بیان فاکتور محرک کلنی گرانولوسیت نوترکیب انسانی با کدون بهینه شده در دو سویه بیانی اشریشیا کلی Origami وBL21

سابقه و هدف: فاکتور محرک کلنی گرانولوسیت (G-CSF) به عنوان فاکتور رشد هماتوپوئیتیک می‌‌تواند سلول‌های بالغ خونی را تحریک نمایند و امروزه نوع نوترکیب آن در درمان نوتروپنی ناشی از شیمی درمانی سرطان‌های سرکوبگر میلوئید، پیوند مغز استخوان، شیمی درمانی در لوسمی میلوئید حاد و نوتروپنی مزمن و شدید به کار می‌رود. هدف از این مطالعه، مقایسه بیان G-CSF نوترکیب انسانی در دو سویه از اشریشیاکلی بوده است. مو...

متن کامل

بهینه سازی بیان تولید پروتئین نوترکیب PapG.AcmA در ﺳﻮﯾﻪ بیانی اﺷﺮﯾﺸﯿﺎ ﮐﻠﯽ

سابقه و هدف: اشریشیا کلی یوروپاتوژن (UPEC) یکی از مهمترین باکتری های بیماری زاست که باعث عفونت مجاری ادراری می شود و هنوز هیچ واکسن انسانی علیه آن ساخته نشده است. هدف از این مطالعه، ﺑﻬﯿﻨﻪ ﺳﺎزی بیان پروتئین ﻧﻮﺗﺮﮐﯿﺐ PapG  به همراه پروتئین لنگری لاکتوباسیلوس به نام AcmA در اشریشیا کلی می باشد. ﻣﻮاد و روشﻫﺎ: ژن کدکننده PapG...

متن کامل

بهینه سازی بیان تولید پروتئین نوترکیب PapG.AcmA در ﺳﻮﯾﻪ بیانی اﺷﺮﯾﺸﯿﺎ ﮐﻠﯽ

سابقه و هدف: اشریشیا کلی یوروپاتوژن (UPEC) یکی از مهمترین باکتری های بیماری زاست که باعث عفونت مجاری ادراری می شود و هنوز هیچ واکسن انسانی علیه آن ساخته نشده است. هدف از این مطالعه، ﺑﻬﯿﻨﻪ ﺳﺎزی بیان پروتئین ﻧﻮﺗﺮﮐﯿﺐ PapG  به همراه پروتئین لنگری لاکتوباسیلوس به نام AcmA در اشریشیا کلی می باشد. ﻣﻮاد و روشﻫﺎ: ژن کدکننده PapG...

متن کامل

ارزیابی بیان فاکتور محرک کلنی گرانولوسیت نوترکیب انسانی با کدون بهینه شده در دو سویه بیانی اشریشیا کلی origami وbl۲۱

سابقه و هدف: فاکتور محرک کلنی گرانولوسیت (g-csf) به عنوان فاکتور رشد هماتوپوئیتیک می تواند سلول های بالغ خونی را تحریک نمایند و امروزه نوع نوترکیب آن در درمان نوتروپنی ناشی از شیمی درمانی سرطان های سرکوبگر میلوئید، پیوند مغز استخوان، شیمی درمانی در لوسمی میلوئید حاد و نوتروپنی مزمن و شدید به کار می رود. هدف از این مطالعه، مقایسه بیان g-csf نوترکیب انسانی در دو سویه از اشریشیاکلی بوده است. مواد ...

متن کامل

بهینه سازی شرایط کشت یک سویه اشریشیا کلی با هدف تولید نیمه صنعتی آنزیم وارونوشتاز نوترکیب

وارونوشتاز مقاوم به دما (trt ) اهمیت زیادی جهت تولید cdna دارد. ژن trt با توانایی تولید این آنزیم، از باکتری geobacillus stearothermophilus strain10 استخراج و توسط حامل بیانی pet28-a در میزبان escherichie coli کلون شد و شرایط رشد این میزبان هترولوگ مورد بهینه سازی قرار گرفت. زیست توده ها جمع آوری شد.عصاره سلولی تهیه، آنزیم مورد نظر تخلیص و غلظت پروتئینی آن سنجیده شد. وارونوشتاز حاصل، جهت rt-pcr...

بیان استرپتودورناز نوترکیب در باکتری اشریشیا کلی

زمینه و هدف: در عفونت های چرکی پوستی، غلظت چرک در ارتباط با دزاکسی ریبو نوکلئوپروتئین هاست.استفاده از استرپتودورناز که یک دزاکسی ریبونوکلئاز است به همراه استرپتوکیناز به حل شدن ترشحات کمک می‎کند، در نتیجه ترمیم زخم در اثر خارج شدن چرک از بافت نکروز شده صورت می‎گیرد. هدف از این مطالعه تولید استرپتودورناز نوترکیب از سوش استرپتوکوک گروه a که از نظر تولید استرپتودورناز پر بازده است، توسط وکتور بیان...

متن کامل

منابع من

با ذخیره ی این منبع در منابع من، دسترسی به آن را برای استفاده های بعدی آسان تر کنید


عنوان ژورنال:
دنیای میکروب ها

جلد ۹، شماره شماره ۱ (پیاپی ۲۶)، صفحات ۶-۱۴

میزبانی شده توسط پلتفرم ابری doprax.com

copyright © 2015-2023